聚丙烯酰胺凝膠電泳

聚丙烯酰胺凝膠電泳

　　聚丙烯酰胺凝膠電泳（Polyacrylamide Gel Electrophoresis，簡稱PAGE）是一種重要的電泳技術，它利用聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質進行電泳分離。以下是對聚丙烯酰胺凝膠電泳的詳細介紹：

　　一、基本原理

　　聚丙烯酰胺凝膠電泳的基本原理是根據(jù)被分離物質分子大小和分子電荷多少來進行分離。帶電粒子在電場中向帶有相反電荷的電極移動，形成電泳。在聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中，加入一定量的陰離子去污劑十二烷基硫酸鈉（SDS），能打開蛋白質分子的氫鍵和疏水鍵，并按比例地結合到這些蛋白質分子上形成帶負電荷的蛋白質-SDS膠束，使蛋白質分子表面完全被負電荷所覆蓋。此時，電泳遷移率僅取決于蛋白質的分子量大小而與其所帶電荷性質無關。因此，在條件一定時，可以根據(jù)蛋白質的電泳遷移率來測定其分子量。

　　二、凝膠制備

　　聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑甲叉雙丙烯酰胺在引發(fā)劑和催化劑的作用下聚合交聯(lián)而成的三維網(wǎng)狀結構凝膠。凝膠的孔徑大小可以通過改變單體和交聯(lián)劑的濃度來調(diào)節(jié)。在制備凝膠時，需要注意以下幾點：

　　丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺的濃度、交聯(lián)度可以決定凝膠的密度、粘度、彈性、機械強度以及孔徑大小。

　　氧能抑制聚合反應，可根據(jù)實驗情況決定是否在聚合前對凝膠混合物進行脫氣。

　　凝膠濃度和交聯(lián)度的選擇應根據(jù)被分離物的分子量來確定。

　　三、電泳類型

　　聚丙烯酰胺凝膠電泳根據(jù)緩沖液、pH值和凝膠孔徑的差異，可以分為SDS-連續(xù)系統(tǒng)電泳和SDS-不連續(xù)系統(tǒng)電泳兩類。此外，按照所制成的凝膠形狀和電泳方式，又可以分為聚丙烯酰胺凝膠垂直管型電泳和聚丙烯酰胺凝膠垂直板型電泳兩類。

　　四、應用特點

　　聚丙烯酰胺凝膠電泳具有以下應用特點：

　　分辨率高：聚丙烯酰胺凝膠的網(wǎng)孔大小可調(diào)，且兼有電荷效應和分子篩效應，因此具有較高的分辨率。

　　重復性好：由于合成聚合物的性質穩(wěn)定，因此聚丙烯酰胺凝膠電泳的重復性良好。

　　操作簡便：聚丙烯酰胺凝膠電泳的操作相對簡便，且電泳時間短。

　　使用范圍廣泛：聚丙烯酰胺凝膠電泳可用于分離和測定蛋白質、多肽、寡核苷酸等生物大分子的分子量，具有廣泛的應用范圍。

　　五、實驗步驟

　　聚丙烯酰胺凝膠電泳的實驗步驟大致如下：

　　制備聚丙烯酰胺凝膠，并注入電泳槽中。

　　將待測樣品與樣品緩沖液混合，并加入電泳槽中。

　　接通電源，進行電泳分離。

　　電泳結束后，取出凝膠，進行染色和脫色處理。

　　觀察并記錄電泳結果，根據(jù)電泳遷移率測定蛋白質的分子量。

　　六、注意事項

　　在進行聚丙烯酰胺凝膠電泳時，需要注意以下幾點：

　　凝膠制備過程中要避免氣泡的產(chǎn)生，以免影響電泳效果。

　　樣品處理時要保證蛋白質的充分解離和變性，以獲得準確的分子量測定結果。

　　電泳過程中要保持恒定的電場強度和溫度，以保證電泳的穩(wěn)定性和重復性。

　　染色和脫色處理時要掌握適當?shù)臅r間和條件，以獲得清晰的電泳圖譜。

　　綜上所述，聚丙烯酰胺凝膠電泳是一種重要的電泳技術，具有高分辨率、重復性好、操作簡便和使用范圍廣泛等優(yōu)點。在生物學、醫(yī)學和化學等領域具有廣泛的應用價值。